С середины 1980-х годов в акушерско-генекологической практике дисбиоз урогенитального тракта у женщин выделен как самостоятельное заболевание – бактериальный вагиноз (БВ). БВ – это инфекционный невоспалительный клинический синдром полимикробной этиологии, связанный с дисбиозом вагинального биотопа. Микрофлора органов мочеполовой системы женщины репродуктивного возраста включает огромное количество микроорганизмов. Микроорганизмы биотопов половых путей женщины выполняют важные физиологически функции и участвуют в поддержании гомеостаза макроорганизма. Поддержание относительно стабильного качественного и количественного состава микробиоценоза вагинального тракта имеет важное значение в обеспечении нормального физиологического статуса женского организма. У здоровых женщин это преимущественно лактобациллы. Лактобактерии – ключевые регуляторы микробиоциноза вагинального тракта. Одно из важных свойств лактобактерий – способность поддерживать естественную кислотность среды в организме за счет выработки молочной и других органических кислот и перекиси водорода. Патогенные бактерии в кислой среде (в пределах 3,8-4,2 единиц) погибают, а условно – патогенные живут в таких условиях в незначительном количестве. При уменьшении кислотности вагинального содержимого в нейтральную или щелочную сторону начинают усиленно размножаться условно–патогенные бактерии, которые в небольших количествах всегда присутствуют в женском организме. Вытеснение одним условно-патогенным видом других членов микробного сообщества приводит к развитию клинической симптоматики вагинита с выраженной лейкоцитарной реакцией и другими признаками воспаления. Состав микроорганизмов, населяющих женский организм, в том числе мочеполовую систему, уникален для каждой женщины и зависит не только от возраста, но и образа жизни. Патологические сдвиги в вагинальном микроценозе могут наступать при изменение гормонального фона (снижение концентрации эстрогенов), при нарушении обмена веществ, при дисбактериозе кишечника и снижении местной иммунологической реактивности, при применении массивных курсов антибиотиков широкого спектра, при наличие воспалительных заболеваний, при применение гормональных средств, иммунодепрессантов и при использовании контрацептивов и других состояниях, ведущих к нарушению иммунного статуса. БВ самая распространенная инфекция нижнего отдела мочеполовой системы у женщин репродуктивного возраста. Особенно важно поддерживать нормальный баланс вагинального микроценоза беременным женщинам и тем, кто только планирует зачатие. Примерно в 50% случаев БВ протекает без клинических проявлений, хотя влияние бессимптомных форм заболевания на репродуктивное здоровье женщины едва ли не более значимы, чем при наличии жалоб, так как они остаются невыявленными и, следовательно, нелеченными. БВ может быть причиной возникновения послеродового эндометрита, привести к преждевременным родам и рождению детей с низкой массой тела, к воспалительным процессам половых органов, гнойно-септическим осложнениям у матери и ребенка в послеродовом периоде. Saidi H. Kapiga et al. показали, что БВ является одним из факторов, способствующих развитию воспалительных заболеваний органов малого таза, приводит к активации латентной вирусной инфекции, увеличивает риск заражения инсайтфекциями, передающимися половым путем, в том числе, передачи ВИЧ-инфекции. Исследования ряда авторов показали, что БВ приводит к увеличению активированных Т–лимфоцитов несущих на своей поверхности CD4-белковые рецепторы, способные связываться с поверхностными белками ВИЧ и таким образом способствует инфицированию клетки. Поступление в организм клеток, нагруженных ВИЧ в количестве превышающем критический порог, индуцирует инфекционный процесс. Наличие БВ у женщин с ВИЧ повышает вероятность заражения этим вирусом их сексуальных партнеров половым путем в 2-10 раз. В ряде исследований было показано, что колонизация слизистой оболочки вагинального тракта лактобактериями, продуцирующими перекись водорода существенно снижают вирусную нагрузку РНК ВИЧ-1 в цервиковагинальном секрете, а отсутствие таких лактобактерий коррелирует с повышением вирусной нагрузки. Своевременная диагностика и адекватное лечение бактериального вагиноза у женщин с ВИЧ может значительно уменьшить риск передачи вируса их сексуальным партнерам. Проблема вагиноза требует переосмысление роли условно-патогенных микроорганизмов в патологии нижнего отдела мочеполовой системы у женщин репродуктивного возраста. Современная диагностика БВ основана на клинической картине и результатах общего мазка. В дополнение к ним используют бактериологический метод. Клинические признаки БВ носят субъективный характер, и по этой причине по данным разных авторов чувствительность клинической диагностики не превышает 50% и требует обязательного лабораторного подтверждения. Использование бактериологического метода в рутинной диагностике БВ затруднено вследствие его трудоемкости, необходимости использования специальных сред и специальных условий роста для анаэробных микроорганизмов, а также вследствие длительности проведения методик и низкой надежности результатов. Кроме того, в последнее время были обнаружены и изучены некультивируемые микроорганизмы, которые имеют сильную ассоциативную связь с БВ, например, Atсайтopobium vaginae, Megasphaera spp., и др. Выявление этих микроорганизмов возможно только с помощью молекулярно-биологических методов, к которым относится полимеразная цепная реакция (ПЦР). Качественное выявление (ответ: да/нет) в мазке возбудителей бактериального вагиноза (Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis, Mobiluncus spp. и др. анаэробов) не имеет клинического значения, т.к. при БВ важна количественная оценка различных групп условно-патогенных микроорганизмов и нормофлоры. Качественного обнаружения этих микроорганизмов недостаточно для назначения лечения, т.к. они могут входить в состав нормального микроценоза. В связи с этим, для диагностики БВ с помощью ПЦР особую актуальность приобрели методики определения концентрации микроорганизмов на основе ПЦР с детекцией результатов амплификации в режиме реальном времени. До недавнего времени в лаборатории ИОККДЦ количественный метод ПЦР в реальном времени применялся только для определения вирусной нагрузки гепатитов HCV и HBV в образцах крови. В настоящее время появилась возможность в течение короткого срока при помощи этого метода установить наличие или отсутствие нарушений баланса урогенитальной микрофлоры – баланса между лактобациллами, выполняющими защитную функцию, и широким спектром условно-патогенных бактерий, которые вызывают бактериальный вагиноз. Количественное определение микрофлоры урогенитального тракта методом ПЦР включает контроль взятия материала, количественную оценку общей бактериальной массы, нормофлоры – Lactobacillus spp и ряда условных патогенов: Enterobacterium spp, Streptococcus spp, Staphilococcus spp, Atopobium vaginae, Sneathia spp, Leptotrichia spp, Fusobacterium spp, Megasphaera spp,Veillonella spp, Dialister spp, Lachnobacterium spp, Clostridium spp, Mobiluncus spp, Corinebacterium spp, Peptostreptococcus spp, Ureaplasma spp, G.vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp, Eubacterium spp, Mycoplasma hominis, Candida spp). На сегодняшний день значительное внимание уделяется анаэробным бактериям, которые ассоциированы с БВ: Atopobium vaginae и Mobiluncus spp. В ряде зарубежных работ показано, что с этими микроорганизмами связана резистентность БВ к метронидазолу и другим антибиотикам, наиболее часто применяемым при лечении БВ. Идентификация Atopobium vaginae у пациенток является дополнительным критерием БВ и прогностическим фактором длительного рецидивирующего течения заболевания. Выявление чувствительного и специфического агента БВ Atopobium vaginae при микроскопическом исследовании затруднено, т.к. он по морфологическим признакам относится к лактоподобным бактериям (грамм-положительные эллиптические кокки или палочковидные микроорганизмы). Метод ПЦР с детекцией в режиме реального времени позволяет проводить уникальные многофакторные количественные исследования условно-патогенных микроорганизмов. ПЦР один из основных методов количественного определения маркеров бактериального вагиноза. Только учет количественных соотношений отдельных видов микроорганизмов в составе микроценоза может в относительно полной мере характеризовать состояние вагинального микроценоза и степень его нарушения. ПЦР-исследование с использованием реагентов набора «Фемофлор» «НПФ ДНК-Технология» в режиме реального времени – быстрый и технологичный метод. Он позволяет выявить широкий спектр микроорганизмов, в том числе, трудно культивируемых. Дает объективную информацию, необходимую для постановки адекватного диагноза. «Фемофлор 16» включает количественное определение значимых для БВ микроорганизмов. Количественные подходы необходимы для определения объема медикаментозного вмешательства и осуществления объективного контроля эффективности лечения и выздоровления пациенток. Своевременно проведенная лабораторная диагностика БВ, правильно поставленный диагноз и адекватное лечение позволит предотвратить воспалительный процесс и избежать такой патологии как бесплодие, внематочная беременность, воспаление матки и яичников и помогут избежать избыточного и длительного лечения и улучшить качество жизни женщины. Профилактика БВ является одной из стратегий профилактики передачи ВИЧ инфекции. Взятие материала для ПЦР анализа. Общие требования Для получения корректных результатов большое значение имеет качество взятия образца биоматериала для исследования, его хранение, транспортировка и предварительная обработка. Исследование урогенитального биоценоза методом ПЦР относится к прямым методам лабораторного исследования, то есть образец биоматериала анализируется на наличие и количество ДНК нормо- и условно-патогенной микрофлоры. Одновременно анализируется качество взятия биоматериала при помощи количественной оценки геномной ДНК человека. Материал для исследований. Решение о необходимости исследовать ту или иную локализацию (уретра, цервикальный канал, влагалище) для оценки состояния урогенитального биоценоза принимает лечащий врач на основании совокупности жалоб пациента и клинической картины. Для исследования биоценоза урогенитального биотопа у женщин используют соскобы эпителиальных клеток: * из влагалища (заднебоковые своды) * уретры * цервикального канала Женщины накануне обследования не должны проводить туалет половых органов и спринцевание. Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал ВОЗМОЖНО БОЛЬШЕЕ КОЛИЧЕСТВО ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК И МИНИМАЛЬНОЕ КОЛИЧЕСТВО СЛИЗИ И ПРИМЕСИ КРОВИ. Неправильное взятие биоматериала может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого, необходимости повторного взятия биоматериала. Биоматериал забирают в пробирку 1,5 мл «эппендорф» с транспортной средой. Порядок взятия материала в пробирку с транспортной средой. * Открыть крышку пробирки * С помощью одноразового зонда сделать соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (уретра, цервикальный канал, влагалище). Перенести зонд с биоматериалом в пробирку с транспортной средой, зонд тщательно прополоскать в транспортной среде (при необходимости взятия биоматериала из нескольких биотопов, повторить процедуру, каждый раз забирая материал новым зондом в новую пробирку). * Пробирку плотно закрыть крышкой, промаркировать. Особенности взятия материала из уретры. Перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов; непосредственно перед взятием биоматериала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном (который можно смочить стерильным физиологическим раствором); при наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15-20 минут после мочеиспускания, при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия биоматериала; в уретру у женщин зонд вводится на глубину 1-1,5 см, у детей материал для исследования берут только с наружного отверстия уретры; Особенности взятия материала из цервикального канала. перед взятием материала необходимо УДАЛИТЬ ватным тампоном СЛИЗЬ и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором; зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см; при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища. Особенности взятия материала из влагалища. Материал должен быть взят до проведения мануального исследования. Зеркало перед манипуляцией можно смочить горячей водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано. Соскоб берут с бокового или заднего нижнего свода влагалища. У девочек взятие материала производят со слизистой оболочки преддверия влагалища, а в отдельных случаях - из заднего свода влагалища через гименальные кольца. Условия хранения и доставки материала Взятый биологический материал должен быть промаркирован. В сопроводительном документе-направлении необходимо указать: пол, фамилию, имя, отчество, возраст пациента, предполагаемый диагноз или показания к обследованию, дату взятия пробы, наименование учреждения, направляющего материал. Материал доставляется в лабораторию лицами, получившими специальный инструктаж, с учетом правил транспортировки. Если время транспортировки биологического материала с момента взятия до момента его доставки в лабораторию от 2 часов до суток, то пробирку с биоматериалом необходимо хранить и доставлять в лабораторию при температуре бытового холодильника (+ 4 - 10оС)), не замораживая. В случае невозможности доставки образца в лабораторию в течение суток, допускается однократное замораживание и хранение образца биоматериала при -20 оС до 1 месяца.

Забор материала (урогенитальный мазок) осуществляется специалистом ИДЦ. За 3-5 суток до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.